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Título: Proteômica do Câncer de pele não melanoma e a avaliação do efeito terapêutico do Ácido gálico no câncer de pele não melanoma e Melanoma
Autor(es): Jesus, Sabrina Ferreira de
Orientador(ra): Guimarães, André Luiz Sena
Membro(s) Banca: Fraga, Carlos Alberto de Carvalho
Santos, Eliane Macedo Sobrinho
Paula, Alfredo Maurício Batista de
Oliveira, Alessandra Rejane Ericsson de
Palavras-chave: Radiação ultravioleta;Neoplasias de pele;Terapêutica;Ácido gálico;Espécies reativas de oxigênio
Área: Ciencias da Saude
Subárea: Saude Coletiva
Data do documento: 2022
Resumo: A radiação ultravioleta é o principal fator de risco ambiental para o desenvolvimento do câncer de pele não melanoma (CPNM) e Melanoma cutâneo (MC). O câncer de pele é um dos mais frequente no Brasil e no mundo, e corresponde a 30% de todos os tumores malignos do país, de acordo com o Instituto Nacional de Câncer, do Ministério da Saúde. A incidência das neoplasias de pele está aumentando cada vez mais nas populações. O Carcinoma de células escamosas cutâneo (CEC) é o segundo tipo mais comum de CPNM. Em decorrência do maior risco de recorrência local, metástase e morte, o CEC é considerado mais grave quando comparado ao Carcinoma basocelular (CBC). Entretanto, o MC é a forma mais grave das neoplasias de pele, podendo aparecer em qualquer parte do corpo, na pele ou mucosas, na forma de manchas, pintas ou sinais. Apesar de mais raro, é bastante agressivo, podendo levar à morte. A busca por marcadores moleculares e agentes terapêuticos tem aumentado de forma expressiva e estudos recentes demonstraram que o ácido gálico (AG) tem se mostrado um potente agente terapêutico. O AG apresenta propriedades antiproliferativas e citotóxicas em vários tipos de células neoplásicas. O objetivo do presente estudo foi identificar um possível biomarcador para CEC, bem como testar a ação do AG no CEC sobre o biomarcador selecionado. Adicionalmente em um estudo piloto, avaliou-se o efeito tópico do AG no MC, uma abordagem in vivo, bem como o efeito do AG sobre parâmetros clínicos tumorais. Os dados obtidos no estudo foram obtidos através de uma metodologia baseada em técnicas moleculares e bioinformática como a análise por Espectrometria de Massa, validação da proteômica, cultivo celular, qrt-PCR, imunohistoquímica e silenciamento gênico. Na primeira etapa do estudo proteômico, realizou se a bioinformática e análises clínicas. Em seguida, na segunda etapa um ensaio de inibição. A triagem inicial de pele normal, ceratose actínica, CBC e CEC foi realizada por espectrometria de massa. O alvo candidato foi então selecionado com base em comparações entre os quatro grupos. Após a validação do alvo, um candidato a inibidor foi escolhido e testado in vitro. Na na experimentação in vivo foi utilizado os camundongos C57BL/6 e foram induzidos a desenvolver no dorso do animal o tumor Melanoma murino. Após o desenvolvimento do tumor o tratamento tópico foi realizado com a pomada de AG5% durante 12 dias, 2x por dia. Após o período, os animais foram sacrificados e comparados com os grupos controles. A aprovação ética foi obtida para ambos estudos e o consentimento informado foi obtido de todos os pacientes que participaram do estudo. Todos os dados são apresentados como média ± desvio padrão. A significância estatística foi estabelecida em p< 0,05. Na análise proteômica do CEC o HSP90AB1 foi o alvo selecionado. A inibição de HSP90AB1 foi obtida por siRNA e AG. O resultado revelou que o efeito do AG foi mais eficiente na redução da migração e proliferação do que o siRNA. Além disso, AG não causou morte de queratinócitos ou aumento da taxa de Espécies reativas de oxigênio. Os dados obtidos com esse estudo sugerem que HSP90AB1 é um biomarcador crucial para invasão e metástase. A inibição de HSP90AB1 pode ser um alvo potencial para o tratamento do CEC. O resultado obtido no estudo piloto com a pomada lipossomal de AG5% mostrou que houve a diminuição da proliferação celular in vivo, ou seja, o grupo tratado com a pomada apresentou um tumor menor do que os grupos controles. O AG tem forte potencial para se tornar um tratamento complementar tópico num futuro próximo.
Descrição: Ultraviolet radiation is the main environmental risk factor for the development of non melanoma skin cancer (NMSC) and cutaneous melanoma (CM). Skin cancer is one of the most frequent types of cancer in Brazil and the world, and corresponds to 30% of all malignant tumors in the country, according to the National Cancer Institute, of the Ministry of Health. The incidence of skin neoplasms is increasing in several populations. Cutaneous squamous cell carcinoma (SCC) is the second most common type of NMSC. Due to the higher risk of local recurrence, metastasis, and death, SCC is considered more serious when compared to basal cell carcinoma (BCC). However, CM is the most serious form of skin neoplasms and can appear anywhere on the body, on the skin or mucous membranes, in the form of spots, spots, or signs. Although rarer, it is quite aggressive and can lead to death. The search for molecular markers and therapeutic agents has increased significantly and recent studies have shown that gallic acid (GA) is a potent therapeutic agent. AG has antiproliferative and cytotoxic properties in several types of neoplastic cells. The present study aimed to identify a possible biomarker for SCC, as well as test the action of AG on SCC on the selected biomarker. Additionally, in a pilot study, the topical effect of AG on CM assessed in vivo, as well as the effect of AG on clinical tumor parameters, was evaluated. The data obtained in the study were obtained through a methodology based on molecular techniques and bioinformatics such as analysis by Mass Spectrometry, validation of proteomics, cell culture, qrt-PCR, immunohistochemistry, and gene silencing. In the first stage of the proteomic study, bioinformatics and clinical analysis were performed. Then in the second step an inhibition assay. The initial screening of normal skin, actinic keratosis, BCC, and SCC was performed by mass spectrometry. The candidate target was then selected based on comparisons between the four groups. After target validation, an inhibitor candidate was chosen and tested in vitro. In the in vivo experiment, C57BL/6 mice were used and they were induced to develop the Murine Melanoma tumor on the animal's back. After the period, the animals were sacrificed and compared with the control groups. Ethical approval was obtained for both studies and informed consent was obtained from all patients who participated in the study. All data are presented as mean ± standard deviation. Statistical significance was set at p<0.05. In the SCC proteomic analysis, HSP90AB1 was the selected target. Inhibition of HSP90AB1 was obtained by siRNA and AG. The result revealed that the effect of AG was more efficient in reducing migration and proliferation than siRNA. Furthermore, AG did not cause the death of keratinocytes or an increase in the rate of Reactive Oxygen Species. The data obtained from this study suggest that HSP90AB1 is a crucial biomarker for invasion and metastasis. Inhibition of HSP90AB1 may be a potential target for the treatment of SCC. The result obtained in the pilot study with the liposomal ointment of AG5% showed that there was a decrease in cell proliferation in vivo, that is, the group treated with the AG ointment had a smaller tumor than the control groups. AG has strong potential to become a topical complementary treatment in the near future.
URI: https://repositorio.unimontes.br/handle/1/703
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